Аналіз на коклюш: як здавати, дослідження крові, мазок і лабораторна діагностика

Кашлюк – це бактеріальна інфекція, що викликається коккобацілламі Bordetella pertussis. Для діагностики цього захворювання використовуються різні лабораторні дослідження; правильний аналіз на коклюш дозволить визначити не тільки наявність хвороби, але і її стадію.

Диференціальна діагностика

Запідозрити коклюш слід при наявності у хворого таких симптомів:

  • кашель неясного походження тривалістю більше 2 тижнів;
  • напади важкого кашлю;
  • симптоми ГРВІ після контакту з хворим.

Діагностика кашлюку починається з диференціації його з гострими респіраторними захворюваннями, грипом, кором, загостренням бронхіальної астми, бронхоаденіта і попаданням в дихальні шляхи стороннього тіла.

Диференціальний діагноз грунтується на наступних рисах схожих захворювань:

  1. Грип починається гостро, спостерігаються симптоми інтоксикації (лихоманка, нейротоксикоз), які переважають над симптомами ураження верхніх дихальних шляхів.
  2. Кір відрізняється присутністю нежиті, чхання, сльозотечі, набряклості слизистих оболонок поряд з кашлем, чого також не буває при кашлюку.
  3. ГРВІ, як і грип, супроводжуються симптомами інтоксикації і ураження слизових. Різні вірусні інфекції можуть характеризуватися запаленням глотки, ознаками запалення бронхів, набряком слизових, кон’юнктивітом.
  4. Туберкульоз характеризується схожими нападами сильного кашлю. Для диференціації хвороб потрібні рентгенографія і реакція Манту.

Таким чином, характерна клінічна картина являє собою тривалі напади кашлю з репризами і лімфоцитоз; ознак інтоксикації і ураження слизових оболонок при цьому немає, що дозволяє відрізнити хворобу від вірусних інфекцій – в цьому і полягає диференціальна діагностика кашлюку.

При підозрі на коклюш для підтвердження діагнозу використовуються різні лабораторні методи дослідження. Основними є ПЛР та бактеріологічний аналіз на ранніх термінах, серологічна діагностика – на пізніх.

Загальні лабораторні дослідження

Загальний аналіз крові на коклюш дозволяє визначити склад крові і виявити наявність лейкоцитозу. Як і в разі інших бактеріальних захворювань, при кашлюку кількість лейкоцитів на одиницю крові зростає, що свідчить про імунній відповіді на поразку збудником. Як правило, виділяють концентрацію лейкоцитів, рівну 2-7 * 109 / л.

Слід враховувати, що вміст лейкоцитів різниться в залежності від того, наскільки важко протікає захворювання; якщо хворий раніше був щеплений, але через ослаблення імунітету все одно захворів, аналіз крові нічого не покаже.

Інші загальні характеристики крові, як правило, не змінюються; зрушення спостерігаються тільки в катаральній стадії хвороби. Швидкість осідання еритроцитів може бути зниженою.

У більшості випадків гематологічна лабораторна діагностика кашлюку обмежується загальним аналізом крові; для виявлення можливих ускладнень також може проводитися біохімічне дослідження, що доповнюється загальним аналізом сечі. Якщо хвороба протікає сприятливо, всі показники будуть в нормі.

Для диференціації коклюшу з астмою, на грип і туберкульоз потрібно здати загальний аналіз мокротиння.

Мокрота при нормальному перебігу хвороби є слизової; якщо хвороба ускладнена пневмонією, до слизу додається гній.

Для уточнення діагнозу широко застосовується для мікробіологічної оцінки коклюшу, до якої відноситься бактеріологічне дослідження (виділення культури збудника) і серологічне обстеження (аналіз на антитіла).

Додатково може використовуватися генетичне дослідження – виділення ДНК збудника в мокроті за допомогою полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР). На пізніх стадіях хвороби ПЛР неефективний.

бактеріологічна діагностика

Бакпосів допомагає визначити захворювання у дитини або дорослого протягом короткого періоду після зараження – колонії збудника в живильному середовищі і температурі 36 ° С починають з’являтися вже на 3-5 добу.

Посів на коклюш робиться на матеріалі з носоглотки пацієнта – мокроті, слизу, зібраному при кашлі або штучним шляхом.

Збирається матеріал з задньої стінки глотки, через 2-3 години після прийому їжі. Застосовується три методи збору слизу:

  • «Кашлеві пластинки» – хворий кашляє на чашку Петрі з поживним субстратом, на якому бацили, що потрапили з крапель слизу, розмножуються протягом 2-4 днів;
  • мазок із зіву за допомогою тампонів – ватні тампони, змочені в альгінат кальцію, вводять через ніс в носоглотку і залишають на 10 с, після чого поміщають в живильне середовище;
  • збір шприцом через тонкий назальний катетер.

Для бактеріологічного дослідження на коклюш важливий правильний вибір живильного середовища, так як бацила Bordetella pertussis розмножується тільки в елективних середовищах. Варіантів три:

  1. Казеїново-вугільний агар. Середовище готується з сухого субстрату, 5 г якого розчиняється в 100 мл води, після чого додається цефалексин в концентрації 40 мг / л. Суміш стерилізується в автоклаві 30 хв при 110 ° C. Колонії бактерій утворюються через 3-4 дня.
  2. Середа Борде-Жангу, яка використовується, якщо через тяжкого перебігу хвороби аналіз на коклюш вимагає збору матеріалу безпосередньо біля ліжка пацієнта. Готується субстрат з 0,5 кг картоплі, 1 л води і 40 мл гліцерину.

    Суміш вариться до розм’якшення картоплі, після чого в неї доливається вода до вихідної концентрації. Суміш фільтрується, в екстракт додається розчин комплексу солей в кількості 1,5 л на 500 мл субстрату. Далі додається 3% агар-агар, суміш кип’ятиться і доводиться до досягнення pH = 7,1-7,2. Після фільтрації та стерилізації субстрат може довго зберігатися.

  3. Молочно-кров’яний агар Осипової. Змішуються 5% МПА, 1% хлориду натрію і така ж кількість теплого знежиреного молока. Суміш стерилізується в автоклаві, фільтрується, після чого до неї додається 1/5 частина дефібринованої тваринної крові. Для виключення сторонньої флори додається 0,25-0,5 од. пеніциліну на 1 мл середовища.

Слід враховувати, що колонії бактерій повільно розвиваються – остаточний результат дослідження може бути отриманий лише на 5-7 добу після посіву. Цей аналіз на коклюш ефективний тільки на ранніх термінах захворювання. Через особливості збудника остаточний діагноз на підставі бактеріологічної діагностики ставиться лише в 15-25% випадків (дані по м Санкт-Петербург).

Відмінні ознаки колоній

На різних субстратах колонії збудника коклюшу проявляються по-різному; важливо знати їх основні ознаки, щоб диференціювати зі схожими колоніями бактерій паракашлюку.

Середа кашлюк паракоклюш
КУА Дрібні, опуклі колонії коккобактеріямі. Блищать, мають гладку текстуру і кремовий колір. Більші розміри, фарбують субстрат в коричневий відтінок. Бактерії – палички.
Борде-Жангу і агар Осипової Гладкі, блискучі колонії коккобактеріямі. Прозорі, мають куполоподібну форму і перловий відтінок. Оточені чіткої гемолізной зоною. Великі колонії паличок з коричневим кольором середовища. Є зона слабкого гемолізу.

Колонії коклюшу слід також відрізняти від бактерій септичного бронхіту. Останні, на відміну від коків, ростуть на субстраті без зміни кольору середовища і мають уреазу.

мікроскопічне дослідження

Методи діагностики коклюшу іноді включають мікроскопічне дослідження в якості допоміжного. Дорослі бактерії коклюшу не мають відмітних морфологічних особливостей, але на ранніх стадіях розвитку їх можна визначити.

На I фазі життя бактерії мають S-форму. Вони грамнегативні, відрізняються дрібними розмірами і однорідністю.

Являють собою палички без суперечка з ніжними капсулами. На II і III фазах бактерії перетворюються в поліморфні або коккоідние форми життя.

Серологічні аналізи на коклюш

Оскільки прямі методи дослідження (бактеріологічний і ПЦР) дають результати тільки на ранніх стадіях розвитку захворювання, при терміні більше 3 тижнів від зараження використовуються серологічні методи – аналізи на антитіла до коклюшу. Основна їх мета – виявити наявність імуноглобулінів IgM в крові і IgA в слизу.

Ці антитіла зберігаються в крові протягом декількох місяців після початку захворювання; через місяць після зараження утворюються імуноглобуліни IgG, що зберігаються протягом декількох років і дозволяють визначити, перехворів пацієнт кашлюк в минулому.

Основні серологічні методи дослідження (РПГА, РА, РНГА) застосовуються також для епідеміологічного аналізу. Діагностичний титр при реакції пасивної гемаглютинації у нещепленої дитину, не переніс коклюш в минулому – 1:80. У щеплених і дорослих пацієнтів титри вважаються діагностичними при наростанні в 4 рази.

Імуноферментний аналіз на імуноглобуліни IgM і IgA – це більш сучасний метод аналізу на коклюш у дітей і дорослих.

Інтерпретувати позитивні (+) і негативні (-) результати можна наступним чином:

IgM IgA IgG розшифровка
коклюш що невиявлений
– або + – або + протікає захворювання
+ – або + коклюш перенесений нещодавно
+ коклюш перенесений давно або була проведена імунізація

Експрес-аналізи на антигени

Існує два методи аналізу, що дозволяють діагностувати коклюш в стислі терміни:

  1. Імунофлюоресцентний. Виявляє корпускулярні антигени в слизу на стінці глотки. Результат доступний вже через 2-6 год.
  2. Латексна мікроагглютінація. Виявляє антигени B. pertussis протягом 30-40 хв.

ПЛР також є швидким методом аналізу; його недоліком є ??неможливість застосування на пізніх термінах захворювання. Експрес-діагностика кашлюку у дітей дозволяє прискорити постановку діагнозу і початок лікування, а також підвищити відсоток лабораторних підтверджень коклюшу.

Ссылка на основную публикацию